聯(lián)系平臺(tái)
家蠶BmNPC2蛋白與BmNPV GP64互作關(guān)鍵位點(diǎn)的鑒定
摘要 由家蠶核型多角體病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)感染導(dǎo)致的家蠶血液型膿病給蠶桑產(chǎn)業(yè)造成巨大損失,然而BmNPV與宿主的互作機(jī)制至今仍然不明晰。前期的研究發(fā)現(xiàn),BmNPC2可顯著促進(jìn)BmNPV感染,BmNPC2蛋白能夠直接與BmNPV的囊膜蛋白GP64互作,敲除BmNPC2影響病毒粒子在晚期內(nèi)體中的膜融合效率。為了鑒定BmNPC2蛋白與病毒囊膜蛋白GP64的互作關(guān)鍵位點(diǎn),首先通過同源建模以及酵母雙雜交試驗(yàn),篩選出BmNPC2蛋白與囊膜蛋白GP64互作的2個(gè)關(guān)鍵區(qū)段。隨后,將這兩個(gè)區(qū)段位點(diǎn)的氨基酸進(jìn)行逐個(gè)突變,酵母雙雜交試驗(yàn)結(jié)果表明N95、D97、P105為關(guān)鍵互作位點(diǎn)。在敲除BmNPC2基因的BmE細(xì)胞中回補(bǔ)突變3個(gè)關(guān)鍵位點(diǎn)的BmNPC2蛋白后,細(xì)胞中BmNPV的病毒相對(duì)載量顯著低于回補(bǔ)野生型BmNPC2蛋白組。以上結(jié)果表明,BmNPC2的這3個(gè)關(guān)鍵位點(diǎn)的突變顯著減弱了BmNPV的感染能力,這些結(jié)果將為進(jìn)一步解析BmNPV侵染家蠶的分子機(jī)制提供參考。